الإنتاج العضوي

: ( ساعة٢٤ اختبار عد مجموعة بكتيريا الكولي فورم) يتطلب فترة زمنيه في حدود 3.2 Coliform Count Test (Time Required: 24 H):

يعتبر اختبار انزيم الفوسفاتيز اختبار كيماوي بينما يعتبر اختبار عد بكتريا الكولي فورم اختبار بكتيري يستخدم لتقدير كفاية عملية البسترة وتنشأ بكتريا الكولي فورم من القناة الهضمية ومن مادة وهذه البكتريا حساسة لعملية البسترة كما.الروث وهي تتواجد طبيعيا باعداد معينه في اللبن الخام تصبغ الشريحة في البرطمان.ان غيابها في منتج اللبن المبستر يوضح كفاية عملية البسترة لمدة دقيقة واحدة ثم تخرج الشريحةNewman's stain المحتوي علي صبغة نيومانStaining Jar .بعد ذلك وتزال الصبغة الزائدة وتغسل في ماء صنبور برفق في كأس مع تغيير الماء مرات عديدة : الفحص الميكروبولوجي للبن الخام واللبن المبستر: النموذج الرابع Module 4 :Microbiological Examination Of Raw And Pasteurized Milk Microbiological Examination Of Raw And Pasteurized Milk Milk obtained from the udder of a healthy cow is expected to be very low in bacterial numbers, however, the microbiological quality of milk may deteriorate due to several factors. Bacteria gain entry to milk due to unhygienic milking methods, inadequate cleaning of equipments and in some cases, as a result of mastitis. Milk is an excellent growth medium for microorganisms when suitable temperature exists. Therefore, once bacteria enter the milk, there count increases with time, thereby resulting in reduced product quality and safety. Common tests employed for bacteriological evaluation of raw milk include direct microscopic examination, standard plate count, coliform count, psychrotrophic and thermophilic bacteria count etc. Although pasteurization kills pathogenic bacteria in milk, many types of heat resistant (thermoduric) bacteria may survive pasteurization, limiting the shelf life of pasteurized milk. Thus, routine evaluation of bacteriological quality of pasteurized milk is also important.

4.1 Direct Microscopic Examination Of Milk (Time Required: 10-15

Min)

Direct microscopic examination is a quite rapid method to determine the bacterial content of milk. It helps in grading the milk samples according to bacteriological quality. The test is quantitative and involves preparation of a smear of a measured volume of milk sample over a specified area on a glass slide, followed by staining and microscopic examination to count the number of bacteria. The morphology of contaminating bacteria can also be

viewed.

4.1.1 Apparatus

Microscope

Sterile 0.01 ml pipettes or syringes

Staining jar

Stage micrometer

Glass slides (marked with 1 cm2 area)

Inoculation loop

Forceps

Beaker with tap water

٣٥٢

The number of microscopic fields to be counted will depend upon the bacteriological quality of the sample i.e. average number of clumps per field. Higher is the clump count, fewer number of fields may be sufficient

to interpret the results.

Usually 50, 25, 10 and 5 fields respectively, should be examined if the average clump count is 0.5, 0.5 to 1, 1 to 10 and 10 to 30, respectively. If the clump count exceeds 30 per field, the number is recorded as

uncountable.

Direct microscopic clump count per ml is obtained by calculating the average number of clumps and by multiplying it with the microscopic

factor.

Observe the leucocyte cells also in the microscopic fields and record them

separately.

The microscopic factor can be determined by measuring the diameter of a microscopic field using stage micrometer and then applying the following

formula:

where r is the radius (in mm) of the microscopic field.

The microscopic factor, once calculated for a given microscope with a definite combination of objective and ocularpiece, can be used as a constant

factor.

:التفسير

4.1.5 Interpretation:

لتدريج عينه اللبنBureau guidelines standards تستخدم الارشادات التاليه للقياسات الهندية

:علي اساس عدد الكتلة بكل ميللي

Bacteriological quality النوعية البكتيرية

جيده

مقبولة

(هزيلة )ضعيفة

.ضعيفة جدا

clump count perml عدد الكتلة بكل ميللي

٥٠٠٠٠٠ اقل من

٤٠٠٠٠٠٠ الي٥٠٠٠٠١ من

٢٠٠٠٠٠٠٠ الي٤٠٠٠٠٠١ من

٢٠٠٠٠٠٠٠ اكثر من

بكل ميللي( ناتج من٥٠٠٠٠٠ )تزيد عنLeucocyte الاعداد الضخمة من خلال بكتريا

.mastitis حيوانات تعاني من التهاب الضرع

Grade

SPC/ml

Very good

Not exceeding 2x105

Good

2x105 to 1x105

Fair

1X106 to 5x106

Poor

above 5x106

٣٥٤

الاحتياطات والتحذيرات4.1.6 Precautions: :

• يجب توزيع ٠.٠١ميللي من عينة اللبن علي الشريحة الزجاجية.

• يراعي عدم غسل الشريحة المصبوغة تحت ماء جاري حتي لا تفقد اللطخة.

• يجب فحص عدد كافي من الحقول للخلايا او للتكتلات البكتيريه حتي تكون النتائج واقعية.

• اثناء تسجيل النتائج عندما لا تظهر الحقول الميكروسكوبية أي تكتلات بكتيرية يجب تسجيلها

صفر خلية او صفر تكتل.

التحديدات:

4.1.7 Limitations:

يحتاج الاختبار الي مهارة وخبرة عملية من اجل النتائج الصحيحة.

تزيد دقة النتائج في عينات اللبن ذات التعداد البكتيري العالي.

٣٥٥

Record sheet - Direct microscopic examination of milk Microscopic factor of

= given microscope

Sample 5

Bacterial clump count

Sample 2 Sample 3 Sample 4

Microscopic field No.

Sample 1

Average clump count per field

Clump count per ml

Bacteriological quality/ Grade

Bacterial morphology

Leucocyte cells

Interpretation

اختبار تعداد الشريحة الزجاجية القياسي )يتطلب ٤٨-٢٤ساعة(:

4.2 Standard Plate Count Test:

هذا الاختبار ) (spcيفيد في تقدير عدد البكتريا الحية في اللبن .ويفيد التعداد في تدريج اللبن الي مصنفات مختلفة .وفي حالة اللبن المعامل بالح اررة يوضح الاختبار عدد البكتريا التي علي قيد الحياة ومن ثم ينعكس ذلك علي المحافظة علي نوعية اللبن.

ويتم ضرب عدد المستعمرات المكونه لوحدات البكتريا المتحصل عليها علي شريحة بيئة الاستزراع في عامل التخفيف فيعطي SPCبكل ميللي لبن ،طبقا للقياسات الهندسية Bureau Indian standardsفان spcفي اللبن المبتسر يجب الا تتجاوز ٣٠٠٠٠بكل ميللي في المحتوي النهائي كما هو موصي به في معامل الالبان .diary plant

4.2.1 Apparatus

Sterilized petri dishes

1 ml pipettes

Test tubes

Test tube rack

٣٥٦

Transfer lower dilutions (10-5, 10-4, 10-3 and so on) of the sample to the corresponding petri dishes in a similar way. The same pipette can be used if inoculation is done beginning with the highest dilution and moving to the

lower dilution serially.

Pour 15-20 ml (approx.) plate count agar culture medium (melted and held at 45 C in water bath) to each petri dish and mix the sample and the culture medium by giving gentle rotation to the petri dish in a horizontal

plane.

Allow the contents to solidify at room temperature.

Incubate the petri dishes in inverted position (bottom side up) in an incubator at 37°C for 24 hours or at 30°C for 48 hours.

4.2.4 Observations And Recording Of Results

Observe the petri dishes for the presence of visible colonies that are present

on the surface or within the media.

Select the pair of petri dishes of the dilution that reveals colonies between

30 and 300 in number. Note down the dilution

Count the number of colonies in each plate irrespective of shape and size.

Record the number and find out the average number of colony forming

units (cfu).

Multiply the average cfu number with the corresponding dilution factor (e.g. 10 for 1:10 dilution, 100 for 1:100 dilution, 1000 for 1:1000 dilution and so on) to obtain the SPC per ml in the sample.

4.2.5 Interpretation

Grading of milk can be done according to the Bureau of Indian Standards

(BIS) guidelines as given below:

Grade

Very good

Good

Fair

Poor

SPC/ml

5

not exceeding 2x10

5

6

2x10 to 1x10

6

6

1x10 to 5x10

6

above 5x10

According to BIS guidelines, SPC in pasteurized milk should not exceed 30,000 per ml in the final container at dairy plant.

4.2.6 Precautions: :الاحتياطات والتحذيرات

.• يجب اجراء الاختبار بواسطة شخص مدرب جيدا وماهر في العمل البكتيري .• درجة ح اررة بيئة الاستزراع اثناء الصب في اطباق بتري يجب الا تكون عاليه • يجب عد المستعمرات البكتيرية عن طريق تعليق طبق بتري في مواجهة ضوء منتشر وذلك لرؤية المستعمرات البكتيرية الموجودة عند كل مستويات بيئة الاستزراع )الموجودة علي السطح او تحت

.(السطح او في القاع

.• يجب الاخذ في الاعتبار المستعمرات البكتيرية الدقيقة جدا

٣٥٨

التحديدات:

4.2.7 limitations:

الاختبار لا يعطي العدد الفعلي للخلايا الحية لان كائنات حية كثيرة ربما لا تكون قادرة علي تكوين مستعمرات في بيئة الاستزراع المعطاه او تحت الظروف البيئية المعطاه )درجة الح اررة والظروف

الهوائية( المستخدمة في الاختبار.

• يحتاج الاختبار الي شخص ماهر معمليا.

• مدة الاختبار طويله جدا.

• هذا الاختبار لا يعكس طبيعة البكتريا من حيث كونها مرضية او غير مرضية.

illustration

٣٥٩

Record sheet - Standard plate count test

Sample

No.

Dilution

-1

Colony count (cfu)

Plate

Plate

Average

I

II

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

10

-1

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

10

-1

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

10

-1

10

-2

10

-3

10

-4

10

-5

10

-6

10

Dilution

factor

SPC/ml

Grade of

milk

1

10

2

10

3

10

4

10

5

10

6

10

1

10

2

10

3

10

4

10

5

10

6

10

1

10

2

10

3

10

4

10

5

10

6

10

1

10

2

10

3

10

4

10

5

10

6

10

4.3. Psychrophilic And Psychrotrophic Bacteria Count Test (Time Required:

7 Days)

Psychrophilic and psychrotrophic bacteria are able to grow at low temperatures (below 10°C) and may cause spoilage of milk held at refrigeration temperatures. Enumeration of these bacteria assumes significance because of their ability to reduce the shelf life of the products even when held in refrigerators. The principle of the test is similar to the SPC test except that the petri dishes are incubated at 5-7°C for 7 days because psychrophiles and psychrotrophs are able to grow and form visible

colonies at this temperature.

: ( ايام٧ )يتطلب الاختبارPsychrotrophic وبكترياPsychrophilic اختبار عد بكتريا أن تنمو عند درجاتpsychrotrophic وبكترياpsychrophilic تستطيع كلا من بكتريا درجات مئوية( وربما تسبب فساد اللبن عند حفظه عند درجات١٠ الح اررة المنخفضة )أقل من shelf life وتعداد هذه البكتريا يكون عاليا بسبب قدرتها علي تقليل مدة الصلاحية.ح اررة الثلاجة وأساس هذا الاختبار يشابه مثيله في.للمنتجات حتي عند حفظها عند درجة ح اررة الثلاجة ايام لان كلا٧ درجة مئوية لمدة٧ – ٥ حيث تحضن اطباق بتري عند جرجة ح اررةspc اختبار

٣٦٠

تستطيع النمو وتكوين مستعمراتpsychrophiles وبكتيريا،pshychrotrophsl من بكتريا

.مرئية عند هذه الدرجة من الحرارة

وفي حالة اللبن الخام يعكس العدد الضخم لهذه البكتريا النوعية الرديئة للبن عند درجة الح اررة المنخفضة وفي حالة اللبن المبستر وجود هذه البكتريا باعداد ضخمة يعزي الي حدوث تلوث بعد .عملية البسترة والذي ينتج عنه فترة حياة افصر )فترة صلاحية( عند درجة ح اررة الثلاجة

4.3.1 Apparatus

Same as in the standard plate count (SPC) test detailed in Section 4.2.1. In addition, a BOD incubator or refrigerator maintained at 5-7°C is required.

4.3.2 Culture Medium/Reagents

Same as in the SPC test detailed in Section 4.2.2.

4.3.3 Procedure

The procedure is similar to the SPC test (given in Section 4.2.3) except that the inoculated petri dishes are subjected to incubation at 5-7°C for 7 days.

4.3.4 Observations And Recording Of Results

After completion of the incubation period, plates are observed and results are recorded by similar procedure as for the SPC test detailed in Section

4.2.4.

4.3.5 Interpretations

In case of raw milk, large number of psychrophilic and psychrotrophic organisms reflect the poor keeping quality at low temperature. In case of pasteurized milk, the presence of psychrophilic or psychrotropic organisms in large number may be due to post-pasteurization contamination resulting in shorter shelf life at refrigeration temperature.

4.3.6 Precautions

Same precautions are required as in the SPC test mentioned in Section

4.2.6.

4.3.6 Precautions: :الاحتياطات والتحذيرات

. spc الاحتياطات في هذا الاختبار تشبه مثيلاتها في اختبار

:التحديدات

4.3.7 Limitations:

ولكن يعطي التعدادpsychrophilic وبكترياpsychrotrophic هذا الاختبار لا يفرق بين بكتريا

.النهائي لكلا النوعين من البكتريا

Record sheet - Psychrophillic and psychrotrophic bacteria count test

Sample No.

Dilution

Colony count (cfu)

Plate I

Plate II

Average

Dilution factor

-1

1

10

-2

10

-3

10

10

10-4

104

10-5

105

10-6

106

10

2

10

3

٣٦١

cfu/ml

Interpretation